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技術(shù)文章

細(xì)胞在適應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)基的時(shí)候要注意哪些事項(xiàng)

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  細(xì)胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細(xì)胞中供給細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),也是培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。無(wú)血清培養(yǎng)基不加動(dòng)物血清,在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入細(xì)胞生長(zhǎng)有效因子,激素等。
  有許多細(xì)胞系是相對(duì)容易適應(yīng)無(wú)血清培養(yǎng)基和無(wú)蛋白培養(yǎng)基的,而對(duì)環(huán)境變化相對(duì)敏感的其它細(xì)胞則難以適應(yīng)變化,這就需要更為專業(yè)的方法來(lái)讓細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境變化。
  而根據(jù)細(xì)胞系的特性,有兩種方法可使細(xì)胞適應(yīng)無(wú)血清培養(yǎng)基。第一種方法是連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法;另一種方法是直接適應(yīng)。
  在適應(yīng)過(guò)程中,細(xì)胞通常對(duì)PH和溫度變化較為敏感。讓細(xì)胞在每個(gè)階段都至少有一個(gè)適應(yīng)過(guò)渡期。
  細(xì)胞存活率和細(xì)胞密度
  細(xì)胞在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期中期快速分裂,且在適應(yīng)過(guò)程開(kāi)始時(shí),存活率大于90%。這一點(diǎn)至關(guān)重要。當(dāng)細(xì)胞需傳代時(shí),建議采用1:2或1:3的小傳代比例,以維持更高的細(xì)胞密度,同時(shí)提供隔絕期間可能有助于細(xì)胞的細(xì)胞生長(zhǎng)因子。
  當(dāng)細(xì)胞適應(yīng)新的培養(yǎng)條件時(shí),在增大細(xì)胞傳代密度。
  細(xì)胞生長(zhǎng)
  如果在適應(yīng)過(guò)程中,細(xì)胞停止了生長(zhǎng),則需讓細(xì)胞有更多的時(shí)間來(lái)適應(yīng)培養(yǎng)基組合。例如,在方法1的階段4,向無(wú)血清培養(yǎng)基添加少量的血清(1-3%)。這樣有助于細(xì)胞更容易地適應(yīng)新的培養(yǎng)基。
  然后,在幾個(gè)過(guò)渡期內(nèi),緩慢地減少血清量,直至學(xué)清量為0。
  懸浮培養(yǎng)物
  一些公司的無(wú)血清培養(yǎng)基和無(wú)蛋白培養(yǎng)基不含血清中所發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞貼壁因子。在一段過(guò)渡期內(nèi),貼壁細(xì)胞將開(kāi)始離開(kāi)表面,并成為懸浮細(xì)胞系開(kāi)始生長(zhǎng)。細(xì)胞也可能因適應(yīng)而發(fā)生形態(tài)變化。監(jiān)測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng)速度,只要細(xì)胞能夠與新系統(tǒng)相融合,任何形態(tài)變化都不重要。
  細(xì)胞叢
  在適應(yīng)于無(wú)血清培養(yǎng)期間,細(xì)胞容易形成叢。傳代培養(yǎng)時(shí),將叢輕輕折斷,使其分散開(kāi)。將培養(yǎng)物從靜止細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)轉(zhuǎn)移到可旋轉(zhuǎn)錐形瓶?jī)?nèi),這樣可能會(huì)有助于防止細(xì)胞叢的形成。
  抗生素
  由于血清蛋白易于粘合到抗生素上,因此,不建議在無(wú)血清適應(yīng)過(guò)程中使用抗生素。如不存在血清蛋白,則抗生素水平可能會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性。
  預(yù)防措施
  確保在開(kāi)始適應(yīng)過(guò)程前,儲(chǔ)存有大量原培養(yǎng)基的細(xì)胞。如果細(xì)胞沒(méi)有存活到下一階段,則在整個(gè)過(guò)程中保存每一階段使用的培養(yǎng)瓶。

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