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技術(shù)文章

核酸提取磁性微球提取純化的方法

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   核酸提取磁性微球通過(guò)對(duì)磁珠進(jìn)行一定的包被(如硅基、氨基、羧基等),從而可以實(shí)現(xiàn)對(duì)核酸的高通量、自動(dòng)化提取。磁珠是一類(lèi)特殊的納微米材料,它們的尺寸通常在零點(diǎn)幾微米到幾微米之間,僅為一根頭發(fā)絲直徑的十幾分之一到幾十分之一,肉眼是無(wú)法觀測(cè)到單個(gè)磁珠的。它們具有超順磁性,在磁場(chǎng)中可以向一側(cè)迅速移動(dòng),聚集在一起,而去除磁場(chǎng)后又能夠迅速恢復(fù)到分散狀態(tài)。
  
  核酸提取磁性微球提取純化的方法:
  1、酚/氯仿抽提法
  通過(guò)酚/氯仿處理細(xì)胞破碎液或者組織勻漿后,在水相中主要溶解以DNA為主的核酸成分,在有機(jī)相中主要是脂類(lèi)物質(zhì),蛋白質(zhì)位于兩相之間。
  2、醇沉淀法
  乙醇能夠消除核酸的水化層,使帶負(fù)電荷的磷酸基團(tuán)暴露出來(lái),NA﹢等帶正電荷離子能與磷酸基團(tuán)結(jié)合,形成沉淀。
  3、層析柱法
  通過(guò)特殊硅基質(zhì)吸附材料,能夠特定吸附DNA,而RNA和蛋白質(zhì)順利通過(guò),然后利用高鹽低PH結(jié)合核酸,低鹽高PH值洗脫,來(lái)分離純化核酸。
  4、熱裂解堿法
  堿法提取主要是利用共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒與線(xiàn)性染色質(zhì)在拓?fù)鋵W(xué)上的差異來(lái)分離他們,在堿性下,變性蛋白是可溶的。
  5、煮沸裂解法
  加熱處理DNA溶液,利用線(xiàn)性DNA分子的特性,通過(guò)離心將DNA片段與變性蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片形成的沉淀分離。
  6、納米磁珠法
  運(yùn)用納米技術(shù)對(duì)超順磁性納米顆粒的表面進(jìn)行改良和表面修飾后,制備成超順磁性氧化硅納米磁珠。該磁珠能在微觀界面上與核酸分子特異性地識(shí)別和高效結(jié)合。利用氧化硅納米微球的超順磁性,在Chaotropic鹽(鹽酸胍、異硫氰酸胍等)和外加磁場(chǎng)的作用下,從血液、動(dòng)物組織、食品、病原微生物等樣本中分離出DNA和RNA。
  7、其他方法
  除了上述常用的方法之外,還有超聲法、反復(fù)凍融法、酶解法及低滲裂解等等多種方法。

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